Kits d'extrait de levure

Les extraits de levure – U-¹³C (ISO1 ou L-ISO1) et non marqués (ISO1-UNL et L-ISO1-UNL) – sont conçus pour la quantification par standardisation interne (c'est-à-dire, ajout de matrice). expériences et pour les évaluations de contrôle qualité en métabolomique non ciblée et ciblée. Les composés contenus dans ces extraits couvrent de larges classes métaboliques (par exemple, acides aminés et organiques, phosphates de sucre, coenzymes) qui sont liées à diverses voies biochimiques (par exemple, cycle du citrate et du glyoxylate, métabolisme des acides aminés et des nucléotides, pentose phosphate) et cellulaires/moléculaires. processus (par exemple, système immunitaire, coagulation sanguine, métabolisme de l'ADN). Ces métabolites ont été rigoureusement caractérisés par plusieurs méthodologies LC-/GC-MS et se prêtent à diverses utilisations en recherche après une simple reconstitution.

Contenu du kit

• Extrait(s) de levure séchés en U-¹³C et/ou sans étiquette.

• Paquet de documents (fourni via le code QR). Le package comprend un manuel d'utilisation, qui contient des exemples de procédures et de méthodes LC-MS pour les références utilisateur.

➤ Stable Isotope Standards for Mass Spectrometry
➤ Stable Isotope-Labeled Products for Metabolic Research 
➤ Stable Isotope-Labeled Mixtures, Sets, and Kits
➤ Mixtures, Sets, and Kits for MS ‘Omics and MS/MS Screening

Application Note
➤ Absolute Quantitation of Fragile Metabolites by Isotope Dilution Mass Spectrometry on the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Technical Note
➤ A Guide to Implementing Targeted and Standardized Clinical Metabolomics Using Stable Isotope-Labeled Standards and Triple Quadrupole Mass Spectrometry

Extraits de levures métabolites et lipidiques

Questions fréquemment posées

De quelle partie du cycle de vie provient l'extrait de levure ? La levure (Pichia pastoris, souche CBS 7435) est dans la phase de croissance exponentielle. Dans cette phase, la cellule utilise la majeure partie du substrat disponible pour se reproduire. Le temps de doublement pour la souche de levure utilisée est d'un peu moins de 3 heures. La croissance exponentielle est assurée grâce à la vérification des mesures de DO 600 pendant la fermentation. La préparation de l'extrait est détaillée dans PMID: 23086617.  

À quoi fait référence le « U » dans U-¹³C (98 %) ? Le « U » désigne un composé uniformément étiqueté. Par exemple, NADP⁺ avec une formule C₂₁H₂₉N₇O₁₇P₃ a 21 C sous sa forme ¹³C-étiquetée.

Quelle est la procédure recommandée pour dissoudre les extraits de levure métabolite séchée ? La procédure recommandée pour solubiliser ISO1 et ISO1-UNL est la suivante :

1. Reconstituer l'extrait dans 2 mL de solvant (par exemple : eau, 50 % de méthanol).
2. Agiter vigoureusement à la main en vortexant à grande vitesse par intermittence (pendant au moins 2 min).
3. Centrifuger à 20°C pendant 5 min à 4 000 rcf.
4. La solution étalon claire peut ensuite être diluée (1/10 v/v) pour une utilisation directe ou préparée davantage pour l'étalonnage et l'ajout de matrice.

Une démonstration vidéo de cette procédure est présentée dans la section ressources ci-dessus.

Dans quels types d’échantillons ces extraits de levure ont-ils été mesurés ? Les extraits ont été appliqués sur des tissus humains (par exemple, le plasma) et des cellules (par exemple, le cancer du côlon) pour un contrôle qualité ou une analyse quantitative par diverses méthodes LC et GC-MS. Le manuel d'utilisation (fourni avec l'envoi du kit via le code QR) de l'ISO1, par exemple, présente trois exemples d'application qui utilisent l'analyse du rapport isotopique pour la quantification absolue ou relative des métabolites.

Quels sont les analytes couramment identifiés dans les extraits de levure ? Une liste tabulée des analytes ou des acides gras/lipides observés lors de mesures de routine, lot par lot, est indiquée dans leurs sections respectives du Mélanges, ensembles et kits marqués aux isotopes stables catalogue. Cette liste n'est pas exhaustive, car d'autres analytes ont été identifiés avec des protocoles alternatifs (par exemple, coenzyme As – acétyle, malonyl, propionyl ; glucose-1-phosphate ; fructose-1-phosphate). Veuillez vous renseigner si d’autres analytes sont intéressants et nous enquêterons.

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