Hefeextrakt-Kits

Die Hefeextrakte – U-¹³C (ISO1 oder L-ISO1) und unmarkiert (ISO1-UNL und L-ISO1-UNL) – sind für die interne Standardisierung (d. h. Matrix-Spike-in)-Quantifizierung konzipiert Experimente und für Qualitätskontrollauswertungen in der ungezielten und gezielten Metabolomik. Die Verbindungen in diesen Extrakten umfassen breite Stoffwechselklassen (z. B. Aminosäuren und organische Säuren, Zuckerphosphate, Coenzyme), die mit verschiedenen biochemischen Stoffwechselwegen (z. B. Citrat- und Glyoxylatzyklus, Aminosäure- und Nukleotidstoffwechsel, Pentosephosphat) und zellulär/molekular verknüpft sind Prozesse (z. B. Immunsystem, Blutgerinnung, DNA-Stoffwechsel). Diese Metaboliten wurden durch mehrere LC-/GC-MS-Methoden gründlich charakterisiert und sind nach einfacher Rekonstitution für eine Vielzahl von Forschungszwecken zugänglich.

Inhalt des Kits

• Getrocknete Hefeextrakt(e) als U-¹³C und/oder unbeschriftet.

• Dokumentenpaket (Lieferung per QR-Code). Das Paket enthält ein Benutzerhandbuch, das Beispielverfahren und LC-MS-Methoden als Benutzerreferenz enthält.

➤ Stable Isotope Standards for Mass Spectrometry
➤ Stable Isotope-Labeled Products for Metabolic Research 
➤ Stable Isotope-Labeled Mixtures, Sets, and Kits
➤ Mixtures, Sets, and Kits for MS ‘Omics and MS/MS Screening

Application Note
➤ Absolute Quantitation of Fragile Metabolites by Isotope Dilution Mass Spectrometry on the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS

Technical Note
➤ A Guide to Implementing Targeted and Standardized Clinical Metabolomics Using Stable Isotope-Labeled Standards and Triple Quadrupole Mass Spectrometry

Metaboliten- und Lipidhefeextrakte

Häufig gestellte Fragen

Aus welchem ​​Teil des Lebenszyklus stammt der Hefeextrakt? Die Hefe (Pichia pastoris, Stamm CBS 7435) befindet sich in der exponentiellen Wachstumsphase. In dieser Phase nutzt die Zelle den größten Teil des verfügbaren Substrats zur Reproduktion. Die Verdopplungszeit beträgt für den eingesetzten Hefestamm etwas weniger als 3 Stunden. Exponentielles Wachstum wird durch die Überprüfung der OD 600-Messungen während der Fermentation sichergestellt. Die Extraktzubereitung ist detailliert beschrieben in PMID: 23086617.  

Worauf bezieht sich das „U“ in U-¹³C (98 %)? Das „U“ bezeichnet eine einheitlich gekennzeichnete Verbindung. Zum Beispiel NADP⁺ mit einer Formel C₂₁H₂₉N₇O₁₇P₃ hat 21 C in seiner ¹³C-markierten Form.

Welches Verfahren wird zum Auflösen der getrockneten Metaboliten-Hefeextrakte empfohlen? Das empfohlene Verfahren zur Solubilisierung von ISO1 und ISO1-UNL ist wie folgt:

1. Rekonstituieren Sie den Extrakt in 2 ml Lösungsmittel (z. B. Wasser, 50 % Methanol).
2. Mit der Hand kräftig schütteln und gelegentlich mit hoher Geschwindigkeit vortexen (mindestens 2 Minuten lang).
3. Zentrifugieren bei 20 °C für 5 Minuten bei 4000 rcf.
4. Die klare Standardlösung kann dann zur direkten Verwendung verdünnt (1/10 v/v) oder zur Kalibrierung und Matrixzugabe weiter vorbereitet werden.

Eine Videodemonstration dieses Verfahrens finden Sie im Abschnitt „Ressourcen“ oben.

In welchen Probentypen wurden diese Hefeextrakte gemessen? Die Extrakte wurden zur Qualitätskontrolle oder quantitativen Analyse mit verschiedenen LC- und GC-MS-Methoden auf menschliches Gewebe (z. B. Plasma) und Zellen (z. B. Dickdarmkrebs) aufgetragen. Im Benutzerhandbuch (per QR-Code im Lieferumfang des Kits enthalten) von ISO1 sind beispielsweise drei Anwendungsbeispiele beschrieben, die die Isotopenverhältnisanalyse zur absoluten oder relativen Quantifizierung von Metaboliten nutzen.

Was sind die üblicherweise identifizierten Analyten in Hefeextrakten? Eine tabellarische Liste der Analyten oder Fettsäuren/Lipide, die bei routinemäßigen Chargen-zu-Chargen-Messungen beobachtet wurden, ist in den jeweiligen Abschnitten der Tabelle angegeben Mit stabilen Isotopen markierte Mischungen, Sets und Kits Katalog. Diese Liste ist nicht endlich, da andere Analyten mit alternativen Protokollen identifiziert wurden (z. B. Coenzym As – Acetyl, Malonyl, Propionyl; Glucose-1-Phosphat; Fructose-1-Phosphat). Bitte erkundigen Sie sich, ob andere Analyten von Interesse sind, und wir werden dies untersuchen.

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